Progamas de Control de Calidad Externo para
Biología Molecular (HCV y HIV)

La aplicación en rutina de los tests moleculares en patología clínica y en hemoterapia es una práctica establecida hace ya algunos años en todo el mundo. De particular interés son los tests para detección de ácidos nucleicos virales, siendo que entre ellos se pueden destacar el vírus de la inmunodeficiencia humana y los vírus de las hepatitis B y C.

Podemos separar los tests en dos categorías: Cualitativos y cuantitativos. Los tests Cualitativos tienen como objetivo dar un diagnóstico de la presencia o ausencia de la infección y en general presentan sensibilidad y especificidad muy altas. Los tests cuantitativos sirven para monitorear las terapéuticas anti virales y consecuentemente pasa a ser más importante la precisión del test con respecto a la determinación de la carga viral. Los tests cualitativos tienen aplicación más amplia en el tamizaje de donantes de sangre, al paso que los tests de carga viral (cuantitativos) se utilizan en la rutina laboratorial para monitorar los pacientes HIV positivos en tratamiento y también para los infectados por HCV y HBV.

La mayoría de los tests moleculares están basados en la amplificación exponencial de segmentos del material genético del blanco, por medio de métodos como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, Roche) o en la amplificación de Ácidos Nucleicos Basado en la Secuencia (NASBA, bioMérieux). También son usados métodos de amplificación de la señal post-hibridización. Los más conocidos son el branched-DNA (Bayer) y la Captura Híbrida (Qiagen/Digene).

La reproducibilidad del test y la observación de buenas prácticas de laboratorio y de cuidados específicos para los tests de biología molecular son aspectos de fundamental importancia. De esa forma, el control de calidad externo es una de las herramientas que el laboratorio debe utilizar para verificar la calidad de sus procedimientos, determinando ajustes cuando sean necesarios.

La herramienta de trabajo utilizada es un panel sueros ciego, compuesto por seis muestras (positivas para HIV, HCV y Negativas), cada una con 1mL, que es enviado a cada seis meses.

Los resultados deben ser reportados a CQ-PANEL en un plazo inferior a 45 días. Posteriormente será enviado un Informe Final con el resumen de los resultados observados en el programa, y una evaluación individual para cada laboratorio participante.

Conjuntamente con este programa, estará a disposición de los participantes (en la Web) un Programa de Educación Continuada (PEC-NAT) con textos y preguntas, con el objetivo de actualización.

El Programa de Control de Calidad Externo para Biología Molecular será dividido en dos modalidades:

Bancos de Sangre
En la rutina de tamizaje molecular de donantes de sangre, el aspecto referente a la sensibilidad del método es fundamental para garantizar la detección de los donantes en periodo de ventana inmunológica, aun más cuando se sabe que la gran mayoría de los centros realiza los tests en sistema de “pools” de muestras, llevando a una multiplicación del valor límite de sensibilidad por el número de muestras contenido en el “pool. El aspecto especificidad es secundario, pero también muy importante por los aspectos humanos y económicos involucrados cuando eventuales resultados falsos positivos sean observados.

Análisis de los resultados
Al contrario de otros programas, ya existe una clave de los resultados esperados y se adoptará un criterio de evaluación entre A y C, de acuerdo con el conjunto de resultados enviados.

Laboratorio Clínico
Un aspecto muy importante en el uso de los tests de biología molecular es la variabilidad. Debido a la multiplicación exponencial, eventuales inibiciones, que puedan ocurrir, también actuan exponencialmente, ocasionando grandes desvíos. Debido a esta característica, se acostumbra atribuir significancia clínica (eficacia o fracaso terapéutico) cuando se observan variaciones mayores que 1 log₁₀ entre dos muestras.

Análisis de los Resultados
Al contrario de otros programas, ya existe una clave de los resultados esperados y se adoptará un criterio de evaluación entre A y C, de acuerdo con el conjunto de resultados enviados. Valores con una diferencia inferior a 1 log₁₀ del resultado de la clave serán considerados correctos.